ePathology.ro

Fluxul activitatii

Timpi de realizare

• Recoltarea
• Fixarea
• Spalarea
• Includerea
• Sectionarea
• Colorarea
• Montarea

• Rezectie chirurgicala
• Rezectie endoscopica
• Biopsie de organ
• Punctie cu ac gros
• Punctie cu ac fin
• Recoltarea la necropsie

• Definitie:
  • proces fizic prin care se ingheata procesele biochimice, pastrandu-se forma celulei si volumul molecular
• Mecanismul:
  • coagularea proteinelor
  • insolubilizare prin precipitare
  • formarea produsilor de aditie
• Scopul:
  • conservarea tesutului impotriva putrefactiei
  • prevenirea pierderii de constituenti celulari
  • cresterea diferentei optice
  • marirea rezistentei tesuturilor

• Fizici: aerul, caldura
• Chimici:
  • Simpli: formol, acetona, alcool metilic, acid osmic
  • Amestecuri fixatoare: apoase sau alcoolice

• Stabilizeaza structurile patrunzand in tesuturi
• Nu deformeaza tesutul si nu dizolva constituentii
• Distruge microorganismele si extrage enzimele autolitice
• Nu-si modifica compozitia si confera consistenta
• Produce diferenta optica

• Decalcifiere (TCA, EDTA)
• Mordansare (substanta ce contribuie la colorare si ameliorarea fixarii)

Scop:

• crearea conditiilor petru sectionarea in sectiuni subtiri, plane, transparente

Mecanism:

• imobilizarea componentelor tisulare, cu pastrarea raporturilor celulare  

Tipuri de mase de incluziune:

• Dupa solubilitatea in apa:
  • Anhidre: parafina (se poate adauga ceara: creste elasticitatea)
  • Apoase: gelatina
• Dupa modul de realizare a includerii:
  • Penetrarea celulei
  • Ramane in spatiul interstitial

Etapele includerii:

• Deshidratarea in concentratii crescute de alcool
• Clarificarea in hidrocarburi aromate sau alcool amilic
• Impregnarea = patrunderea in profunzime a parafinei topite
• Turnarea blocurilor

Sectionarea

• 

  Microtom: rotativ sau culisant, manual sau semi - automat
• Grosime: 5-7 ?m (pentru IHC: 3 ?m)
• Elemente:
  • suport pentru cutite (lame)
  • portobiectul
  • capul mobil
  • micrometru
• Aderarea: cu albumina Meyer

Colorarea

Scop:

• cresterea contrastului prin modificarea indicelui de refractie cu coloranti, care se leaga electrostatic de preparat

Mecanism:

• penetrarea celulei si atasarea de componentele celulare pentru diferentierea optica.
• Colorantul poate contine:
  • Grupari cromofore – purtatoare de culoare
  • Grupari auxocrome – au capacitate de a colora. Exista 2 tipuri:
  • Ionizate – formeaza legaturi electrochimice cu substratul (schimb de electroni: cedare – acceptare)  
  • Neionizate – formeaza legaturi de hidrogen cu substratul  

Etape

• Deparafinarea  - dizolvarea parafinei cu hidrocarburi aromatice (3 bai succesive)
• Hidratarea – eliminarea solventilor parafinei (3 bai succesive de alcool cu concentratii scazute timp de 2-5 min.)
• Colorarea cu solutie apoasa sau alcoolica
• Spalarea cu apa distilata pentru indepartarea excesului de colorant
• Clarificarea – indepartarea alcoolului cu xilol

Tipuri:

• Coloratie progresiva = actiunea colorantului este sistata prin spalare cand s-a evidentiat structura cautata
• Coloratie regresiva = actiunea colorantului este prelungita pina la supracolorare, apoi se intervine cu un decolorant (diferentiator), a carui actiune este oprita prin spalare

Montarea

Scop si mecanism:

• Protejarea de deteriorari
• Conservare si asigurarea unui mediu omogen

Medii de montare:

• Naturale
  • Anhidre: balsam de Canada, colofoniu
  • Apoase: glicerina, sirop Apathy
• Sintetice: entelan, pertex